细胞冻存是细胞保存的重要方式，通过低温来延缓细胞的生命活动。这项技术使得细胞能够被有效保存，必要时可复苏用于多种实验和应用。

冷冻技术的发展历程

19世纪末，科学家开始探索低温对生物组织的影响，早期研究表明，单纯的冷冻会导致细胞内部形成冰晶，并引起渗透压失衡，从而造成细胞死亡。1937年，Luyet和Hodapp提出了“冰晶损伤”理论，为冷冻保护的研究奠定了基础。

冷冻保护剂的应用

1949年，英国科学家在研究精子的冷冻过程中发现，甘油能显著提高冷冻后精子的存活率。作为一种渗透性冷冻保护剂（CPA），甘油能够进入细胞内部，降低冰点，减少冰晶形成，同时通过平衡细胞内外的渗透压，防止细胞因脱水而破裂。1959年，科学家发现二甲基亚砜（DMSO）同样具备优异的冷冻保护特性，尤其适合哺乳动物细胞。DMSO能够比甘油更容易穿透细胞膜，并且毒性较低，迅速成为细胞冻存的标准保护剂之一。

冷冻损伤理论和冻存策略

1963年，Peter Mazur提出冷冻损伤的“两因素假说”：在快速冷冻时，细胞内的冰晶形成会损害细胞膜和细胞器；而在慢速冷冻时，细胞外冰晶的形成会导致细胞脱水，进而提高细胞内溶质的浓度，造成化学毒性。这一理论为程序化慢冻法提供了科学依据。目前，大多数细胞的冻存遵循“慢速冻存”的原则，通过程序降温设备控制降温速率（通常为1°C/min），使细胞在冷冻过程中逐步脱水，避免细胞内部结冰，这一方法显著提高了冻存细胞的存活率。

DMSO的最佳使用浓度

研究表明，5%-10%的DMSO最适合用于细胞冻存，具体比例应根据细胞种类进行调整。对于DMSO敏感的细胞，需降低使用比例。根据小尚的经验，8%的DMSO适用于大多数细胞系。另外，细胞培养的难易程度也应影响血清比例的选择，培育难度越大的细胞则需要增加血清用量，脆弱细胞则可采用血清+DMSO的冻存方案，而不添加培养基。

推荐冻存液及相关产品

我们常用的冻存液配方为92%胎牛血清（FBS）+8% DMSO（新手推荐）或92%完全培养基+8% DMSO（高手推荐）。尊龙凯时的特级胎牛血清呈浅黄色澄清，经检测确认无菌、无支原体、无噬菌体及相关牛源病毒，且低内毒素（＜3EU/mL），不含外源激素、生长因子或抗生素等，能有效用于培养肿瘤细胞、原代细胞及多数干细胞。

此外，尚恩非程序性细胞冻存液（货号：SNR-006）是一种不含血清且无需经过程序降温步骤的冻存液，用户可在重悬细胞后直接置于超低温冰箱，大大简化了冻存操作，并减少了血清对细胞及实验的影响。无论使用何种冻存液，都建议进行冻检，即在冻存24小时后复苏一支，以确认细胞状态正常后再进行大规模冻存。冻检成功之前，需保留至少一瓶细胞培养，以避免因复苏失败导致细胞的绝灭。

公司简介

尊龙凯时的母公司—武汉尚恩生物技术有限公司，位于武汉东湖高新区光谷生物城，专注于细胞及相关产品的研发、生产和服务。公司拥有标准化的GMP实验室和动物房，通过了GB/T19001-2016/ISO9001:2015质量管理体系认证，并获得多项高新技术企业荣誉。公司主要研发、生产各类细胞系、原代细胞、胎牛血清、基础培养基、完全培养基及辅助试剂等系列产品，提供一站式的细胞及培养配套产品采购服务；目前细胞库储存细胞系700余种，公司还提供STR鉴定、种属鉴定、细胞标志物检测等相关实验服务。尚恩生物的产品为国内各大高校、生物实验室和制药公司提供了完善的细胞资源及配套试剂，公司将持续致力于提升产品质量，为广大科研工作者提供卓越的产品和服务。